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深入分析下生化試劑盒的測試原理

發布時間: 2022-10-25  點擊次數: 124次
  生化試劑盒應用領域廣泛,涉及酶類、氧化應激、鐵死亡、肝功能、腎功能、氨基酸蛋白、糖酵解、無機鹽離子、脂質代謝、植物抗逆性等。檢測樣本類型豐富,涉及多種體液、組織、細胞、食品、植物、藥物、化妝品等。主要的檢測儀器為酶標儀,分光光度計和熒光酶標儀。
 
  生化試劑盒的反應原理:
 
  對于延遲區來講,無規律可尋,對于指標檢測沒有意義。
 
  等速區對應的指標檢測方法是速率法。速率法又稱連續監測法,是在測定酶活性或用酶法測定代謝產物時,連續選取時間-吸光度曲線中線性期內4個以上測光點作為讀數點,并以單位時間吸光度變化值計算結果。線性期就是此期間內各測光點之間的吸光度差值相等,此線性期對酶促反應的底物來說屬于零級反應。其測光點一般設置在加入啟動因子并孵育一段時間后開始,持續1-3min,一般應用于酶類項目,可以使用因數法來計算待測濃度。
 
  過渡區對應是固定時間法,是終點法中存在一種特殊情況,指在時間-吸光度曲線上選擇兩個讀數點,此兩點既非反應初始吸光度亦非平衡點吸光度,這兩點的吸光度差值用于結果計算。目的是解決某些化學反應的非特異性問題,提高準確度。
 
  平衡區對應的是終點法,按測光點的個數分為:一點終點法、兩點終點法。
 
  一點終點法是指在反應到達平衡點,即在時間-吸光度曲線上吸光度不再改變時,選擇一個測光點計算待測物質濃度。
 
  兩點終點法常應用于雙試劑的測定項目中,多數一試劑通常只含緩沖液等成分,它與樣本一般不起特異性反應;因此在二試劑加入前,選擇一個測光點作為第一讀數點,此時的吸光度相當于樣品空白。加入二試劑后待測物質起反應,并經過一定時間反應到達平衡點,此時選擇二個讀數點,兩讀數點吸光度之差用于計算待測物質濃度。
 
  兩點法能有效消除樣品溶血、黃疸、脂濁等造成的光吸收干擾。如:酶法測定葡萄糖、總膽固醇、甘油三酯、尿酸、肌酐,以及化學法測定總蛋白、總膽紅素、直接膽紅素、鈣、磷、鎂、鐵等;并且都能在加入第二試劑后的2-5 min內達到反應終點。

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